John Cameron Mitchell a réalisé le film « Rabbit Hole » avec Nicole Kidman (nommée aux Oscars dans la catégorie Meilleure Actrice) pour lequel il a été nominé pour l’Independent Spirit Award, catégorie Meilleur Réalisateur. Il a écrit, réalisé et joué dans le film « Hedwig and the Angry Inch » (2001), pour lequel il a reçu le prix du Meilleur Réalisateur et Prix du Public au Festival du Film de Sundance. Il a également été nominé aux Oscars dans la catégorie Meilleur Acteur.Il est le producteur délégué du documentaire « Tarnation » de Jonathan Caouette (2004). Son film « Shortbus » est sorti en 2006. À Broadway, la mise en scène de « Hedwig and the Angry Inch » a reçu le Tony Award pour la Meilleure Reprise d’une Comédie Musicale (2014).
En 2015 John est récompensé d’un Special Tony Award pour sa reprise du rôle principal. Son film « How to talk to girls at parties » est présenté pour la première fois Hors Compétition au Festival de Cannes en 2017.